科普下瑞氏染色法知识点有哪些

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瑞氏染色法：

1.瑞氏染料 由酸性染料伊红(E-)和碱性染料亚甲蓝(M+)组成。伊红通常为钠盐，有色部分为阴离子。亚甲蓝(又称美蓝)为四甲基硫堇染料，有对醌型和邻醌型两种结构。通常为氯盐，即氯化美蓝，有色部分为阳离子。美蓝容易氧化为一、二、三甲基硫堇等次级染料(即天青)。将适量伊红、美蓝溶解在甲醇中，即为瑞氏染料。甲醇的作用：一是溶解美蓝和伊红;二是固定细胞形态。

2.染色原理 既有物理的吸附作用，又有化学的亲和作用。各种细胞成分化学性质不同，对各种染料的亲和力也不一样。如血红蛋白、嗜酸性颗粒为碱性蛋白质，与酸性染料伊红结合，染粉红色，称为嗜酸性物质;细胞核蛋白、淋巴细胞、嗜碱性粒细胞胞质为酸性，与碱性染料美蓝或天青结合，染紫蓝色或蓝色，称为嗜碱性物质;中性颗粒呈等电状态与伊红和美蓝均可结合，染淡紫红色，称为嗜中性物质;原始红细胞、早幼红细胞胞质、核仁含较多酸性物质，染成较浓厚的蓝色;中幼红细胞既含酸性物质，又含碱性物质，染成红蓝色或灰红色;完全成熟红细胞，酸性物质彻底消失后，染成粉红色。

3.pH值的影响：细胞各种成分均属蛋白质，由于蛋白质系两性电解质，所带电荷随溶液pH而定，在偏酸性环境中正电荷增多，易与伊红结合，红细胞和嗜酸性粒细胞染色偏红，细胞核呈淡蓝色或不染色;在偏碱性环境中负电荷增多，易与美蓝结合，所有细胞呈灰蓝色，颗粒呈深暗，嗜酸性颗粒呈暗褐，甚至棕黑色，中性颗粒偏粗，呈紫黑色。稀释染液必须用缓冲液，冲洗用水应近中性，否则可导致细胞染色反应呈色异常，形态难以识别，甚至错误。